Kolik stojí transformace ligace?

2024 Autor: Miles Stephen | [email protected]. Naposledy změněno: 2023-12-15 23:34

Proměna . Přidejte mezi 1-5 µl podvázání směs do kompetentních buněk pro proměna . Rozšířené podvázání s PEG způsobí pokles in proměna účinnost (rychlá Ligace Kit). Elektroporace se doporučuje pro velké konstrukty (>10 000 bp).

Kolik ligačního produktu potřebuji pro transformaci?

Proměna . Přidejte mezi 1-5 µl podvázání směs do kompetentních buněk pro proměna . Rozšířené podvázání s PEG způsobí pokles in proměna účinnost (rychlá Ligace Kit). Elektroporace se doporučuje pro velké konstrukty (>10 000 bp).

Následně je otázkou, co je ligace a transformace? Při typickém klonovacím experimentu vědci nejprve vloží kousek DNA, například gen, do kruhového kousku DNA zvaného plazmid. Tento krok využívá restrikční enzymy a DNA ligázu a nazývá se a podvázání . Po podvázání , dalším krokem je přenos DNA do bakterií v procesu zvaném proměna.

Následně se lze také zeptat, kolik DNA je potřeba pro ligaci?

Celková koncentrace vektoru + insertu by měla být mezi 1-10 ug/ml pro účinnost podvázání . Doporučuje se molární poměr vektor:vložka mezi 1:1 a 1:10 (typický je 1:3). Pokud si nejste jisti svým DNA koncentrace, proveďte více ligací s různými poměry.

Jak dlouho můžete uchovávat ligační reakci?

Ligace mohou provádět při pokojové teplotě nebo chladnějším (předpokládejme 12-16 °C) přes noc nebo dokonce několik dní, jestli ty jsem opravdu zaneprázdněn. Můžeš taky uložit ligaci v lednici a vyjměte ji později, abyste mohli pokračovat v ligování při pokojové teplotě dlouho jako nezbytné.